武漢病毒所石正麗:一直提醒預防,沒想到疫情就發生在自己生活的城市
時間:2020-03-20  
     
為傳播科學知識,破除新冠謠言,襄助戰勝疫情,由錢穎一、饒毅、潘建偉三位學者共同發起的非營利性公益組織“智識學研社”聯合“騰訊基金會”最近邀請到六位頂尖專家開展系列科普公益直播活動“2020科學抗疫”。
 
此次系列直播活動旨在為抗擊疫情留存科學的記錄和貢獻,使每一位關注科學、關注疫情的觀眾都能聆聽到專業、詳實的分享。
上周,《知識分子》分享了復旦大學分子病毒學家袁正宏帶來的第一講:病毒為何經常光顧人類。今天,我們繼續推出分子病毒學家、中國科學院武漢病毒研究所新發傳染病研究中心主任石正麗帶來的第二講:“知己知彼——了解新型冠狀病毒”。
 
講者 | 石正麗
整理 | 王心玥
編輯 | 李   娟
 
非常感謝智識學研社邀請我給大家講有關新型冠狀病毒的研究進展。今天我的講座的題目是《知己知彼,了解新型冠狀病毒》,其實到今天我們認識新型冠狀病毒也就兩個月零10天,離 “知己知彼” 還差得很遠。不過,這是公眾以及研究資助機構對科學家的要求。我們將按照這個要求,進一步去研究新型冠狀病毒,希望有更多的知識分享給大家。
 
病毒的基本特征
 
首先,我簡單介紹一下病毒的基本知識。
 
病毒是一類很小的介于生命與非生命之間的生物大分子,大概在15納米到1800納米,形態多樣,有絲狀、彈狀、球狀的。病毒無處不在,有生命的地方就有病毒的存在,在我們的環境中,水、土壤、人體、動物體內都是有很多病毒,但只有很少病毒可以感染人類。病毒需要在細胞內寄生,不能自主復制。如果病毒離開細胞,體外存在幾個小時或者是幾天就會滅活,要一直等到遇到下一個敏感細胞以后,病毒才能夠繼續完成生命周期。病毒的遺傳物質要么是DNA,要么是RNA,沒有DNA和RNA同時存在的這種情況。
 
很多人都會把病毒和細菌混在一起,但是它們是非常不同的。首先,就大小來說,病毒是納米級的,細菌是微米級的,所以只能在電子顯微鏡下才能觀察到病毒的形態,而普通顯微鏡下就能觀察到細菌。其次,病毒是一個核酸和蛋白質的復合物,只有進入到細胞和動物體內才能夠完成生命周期。而細菌是有細胞結構的,在體外可以進行細菌培養。舉幾個例子,大家經常見到的病毒有流感病毒、乙肝病毒、SARS病毒以及正在流行的新型冠狀病毒;常見細菌有結核桿菌、傷寒、布魯氏桿菌等。最后,針對病毒與細菌感染的治療方法也是完全不同的。治療病毒性疾病需要用抗病毒藥物治療,細菌用抗生素??股貙Σ《拘约膊∈菦]用的,反過來抗病毒藥物對細菌也是沒有用的。
 
冠狀病毒的名字里為什么有個 “冠”?這是從電子顯微鏡下拍到的冠狀病毒形態而來。在這類病毒丘狀表面上有一些顆粒凸起,就像中世紀皇冠上面的明珠。在冠狀病毒表面蛋白中,有一種名叫刺突蛋白。刺突蛋白主要在病毒感染細胞的過程中發揮作用,它會和細胞受體結合,然后進入細胞,來完成它的生命周期的第1步。除了刺突蛋白以外,還有一些其他組成蛋白,比如基質蛋白M蛋白、小囊膜蛋白E蛋白,一起組成堅固的外殼來保護病毒的遺傳物質。在冠狀病毒內,還有一種核衣殼蛋白,和遺傳物質緊緊包裹在一起,以保證遺傳物質不會被降解。
 
冠狀病毒的直徑大小是120~140納米,它是一類有囊膜的單鏈正義RNA病毒,也是RNA病毒里基因組最大的病毒。
 
冠狀病毒科的分類很簡單,雖然現在有更高一級的分類,隨著病毒的發現越來越多,有更高級別的分類,常見的是在科水平。我們平時說的冠狀病毒指的是冠狀病毒科下邊的冠狀病毒亞科的成員。在冠狀病毒亞科里面有4個冠狀病毒屬,分別是阿爾法、貝塔、伽馬和delta冠狀病毒。其中阿爾法和貝塔冠狀病毒是占了29種。這29種主要是感染包括人類在內的哺乳動物。伽馬和delta冠狀病毒主要感染禽類,但是最近也發現這兩個屬的病毒也可以感染哺乳動物,比如伽馬冠狀病毒可以感染海獅,delta冠狀病毒可以感染豬和馬,造成家養動物的經濟損失。
 
冠狀病毒與疾病
 
冠狀病毒和人類的關系很密切。我們對冠狀病毒的認識是在2003年SARS爆發以后,認識到冠狀病毒是可以引起人類的嚴重疾病的。在2003年之前,只有兩種冠狀病毒被發現,他們是人類冠狀病毒的229E和OC43,只是引起普通的感冒,在一些年長的人或者免疫缺陷的人中可能會引起嚴重肺炎。除了這兩個致病輕微的以外,還有兩種冠狀病毒NL63和HKU1也會引起輕微感染。這4種冠狀病毒引起的疾病是自限性的,我們可以抵抗它們的感染。
 
這4種病毒都已經在人群里邊安寨扎營了。但還有其他3種冠狀病毒會引起嚴重急性肺炎。一個就是2003年的SARS病毒,另一個是2012年在中東爆發的MERS病毒,再現在正在流行的2019新型冠狀病毒。它們的共同特點就是會導致人類嚴重急性肺炎。
 
而動物冠狀病毒和動物的疾病關系內容就更多了。
 
實際上,我們對冠狀病毒的認識大部分來源于對動物冠狀病毒的了解,其中一個就是鼠肝炎病毒。與人冠狀病毒引起呼吸道疾病不同,大部分動物冠狀病毒會引起腸胃炎,該疾病會造成家養動物的經濟損失。這里我想提一下,我們看到在前面動物冠狀病毒發現時間都在1960年代和1970年代,但實際上2014年發現的一個delta冠狀病毒的感染也會造成胃腸炎。還有一個值得提的就是豬急性腹瀉冠狀病毒,是2017年我們和其他兩個團隊在廣東豬場發現的,我們命名為SADS冠狀病毒,是近幾十年來發現的第1例由蝙蝠冠狀病毒跨種感染給豬的。所以這個病毒和新型冠狀病毒不是同一病毒,甚至都不在同一冠狀病毒屬。
 
那么,我們為什么稱之為 “新冠狀病毒”?實際上,對所有新發傳染病來說,只要沒有在歷史上發現過此類病毒感染,沒有找到已知的遺傳信息,我們都會認為是新的病原。所以每一次發現一個新的冠狀病毒,我們都會把它叫做新型冠狀病毒。比如說我們在2018年發現的感染豬的冠狀病毒,剛開始也把它叫做新型冠狀病毒。
 
這次2019年新型冠狀病毒在人類的流行病史上沒有被發現過,在公開基因庫里也沒有此病毒的遺傳信息,對這類病人也沒有針對性的治療藥物和預防性的疫苗。盡管最初的致死率不高,但我們對這個病毒了解的太少,對新的致病機理不了解,這就容易造成恐慌,產生各種各樣的不真實信息。
 
鑒定過程
 
在流行性疾病發生以后,第一件重要的事情就是要對病原進行識別。
 
接下來,我會向大家介紹一下我們團隊在2019年12月30號拿到7個病人樣本后的短短6個星期內做了些什么工作:
 
從我們30號拿的樣本到完成病原體鑒定,用了不到6個星期完成整個科赫氏法則的驗證(注:科赫法則是傳染病病原鑒定的金標準)。當年SARS的時候完成這個程序用了5個月。所以說,我們快速的反應以及前期的技術積累為這次工作奠定了很好的基礎,而這次的工作又為后續藥物的篩選、疫苗的研制都打下了非常好的基礎。
 
命 名
 
新的疾病來襲,完成了病人的鑒定,我們就需要對其命名。命名是要遵循一些規則的,世界衛生組織最開始就把病毒命名為 “2019新型冠狀病毒”,把該疾病命名為”冠狀病毒疾病“,而衛健委的命名是 “新型冠狀病毒肺炎”。最近,世界衛生組織和衛健委達成了協議,全世界都用統一的名字,即冠狀病毒疾病 COVID-19。 
 
在命名的過程中,我們還有一個國際病毒學命名委員會的命名。國際病毒學命名委員會有針對不同科病毒的專業小組,這些專業小組負責對新發現的病毒進行命名,他們的命名是嚴格按照病毒的基本特性、基因組序列和已知病毒之間的關系,所以比較學術化。
 
由于新型冠狀病毒和SARS病毒之間有一定的親緣關系,國際病毒學命名委員會把這個病毒命名為 “SARS冠狀病毒2”。這從學術上面講是沒有問題的,但是實際上新型冠狀病毒和SARS病毒之間還是有很多差別,不僅是基因組差別,還有流行病學、致死率等不同。所以我們中國病毒學專業委員會的幾位成員希望能夠給病毒另一個名稱,一個俗稱,最近我們建議把它命名為 “人冠狀病毒19”,即HCoV-19,主要是為了對應前面說的其他人類冠狀病毒。
 
臨床癥狀
 
新型冠狀病毒潛伏期最長到14天,但是大部分是在3~7天,這就是隔離14天的依據。大多數被感染患者最開始癥狀是發熱、干咳、乏力, 有一些會引起肺炎,還有少數人會有流涕、咽痛、胸悶、腹瀉。
 
根據最近的流行病學的分析,80%以上的患者是輕癥的,還有少數患者是沒有癥狀和沒有肺炎表現的。最嚴重的重癥患者主要來源于老年人和有基礎疾病史的人。所以這個疾病雖然傳染性很強,但是很多人能夠用自己的免疫力去戰勝它。因此我們更要關注的是危重人群,也就是敏感人群,把醫療資源讓給這部分人。
 
傳播途徑及感染特征
 
和其他呼吸道傳播的疾病很相似,新型冠狀病毒也是通過呼吸道飛沫進行傳播,可以通過人和人之間的接觸傳播。病毒也可存在于糞便和尿液里。因此,除了戴口罩、進行隔離以外,還應該注意個人衛生,勤洗手。
 
最近討論也比較多的是到底有沒有氣溶膠傳播?氣溶膠傳播在病毒的傳播過程中并不是主要的,在一些特定的環境比如說醫院、高密度高聚集的人群里面,可能會有些氣溶膠的傳播,但是不是主要的傳播途徑,所以大家不要慌。
 
這個病毒主要是感染呼吸道、肺部的上皮細胞。但是病理解剖發現,在重癥以及死亡病人中存在多器官感染,除了肺部,心肝腎腸都有病毒感染,說明這個病毒還是一個全身性感染的病毒。
 
感染病患的診斷方法
 
在診斷方面,首先依靠流行病學史,比如有沒有到過華南海鮮市場,有沒有和患者接觸等,還要依靠肺部影像學檢驗,還有分子核酸檢測。核酸檢測是目前作為診斷的常用手段,但也存在假陰性現象,這是為什么呢?
 
因為這個病是下呼吸道感染疾病,取樣檢測的時候,如果讓醫護人員進行肺泡灌洗,在下呼吸道取樣是非常危險的。取樣的質量不好或者取樣時間不對,就有可能造成假陰性。這時可用其他方法進行補充,比如多點取樣、多樣本取樣,不僅要取咽拭子,還可以取糞便、血液;不僅做核酸檢測,還可以做血清抗體檢測。這樣就可以提高整個陽性診斷率。
 
在過去,沒有分子生物學手段的時候,采用病毒分離進行診斷是一個金標準。在目前出現大量病例的情況下,我們是不可能去做病毒分離的。但是在做病毒鑒定的時候,是一定要分離到病毒的。
 
基因組特征
 
大多冠狀病毒其實長的都一樣,大小也一樣,很難去通過表面判斷病毒的差別。我們判斷的標準是根據它的基因組特征。
 
冠狀病毒是一個單鏈正義的RNA病毒。我們可把整個冠狀病毒基因組比作積木,編碼每個蛋白的基因就像積木上的一個個模塊,下圖左邊部分的基因編碼的主要是和病毒復制和轉錄相關的蛋白,相對來說在同種病毒之間比較保守。右邊的這部分基因主要編碼組成病毒外殼的結構蛋白,藍色部分編碼的是一些散落在結構蛋白之間的附屬蛋白。之所以稱為附屬蛋白,是說即使刪除這些基因,也不會對病毒復制造成影響。在同種病毒之間,變異最大的就是附屬蛋白。非結構蛋白以及結構蛋白在同種冠狀病毒之間是相對保守的。
 
 
這里我想重點強調一下新型冠狀病毒和其他冠狀病毒之間的基因組差別。如上圖所示,我這里比較的是MERS冠狀病毒、SARS冠狀病毒,還有最近剛剛公布的穿山甲冠狀病毒以及蝙蝠冠狀病毒。
 
新型冠狀病毒和蝙蝠類、穿山甲冠狀病毒是很相似的。最相似的一點在哪里呢?請注意負責病毒吸附并融合細胞的S蛋白上面標有紅色箭頭的位點是 furin(PRRA)酶位點。有這個位點S蛋白很容易被酶切開,病毒的感染性可能就會很強。在人類新型冠狀病毒里面,就出現了這么樣一個位點。
 
這個位點在蝙蝠冠狀病毒里面是不存在的,所以大家會問這個位點是不是人為插入的?,F在我告訴你,這個位點在自然界是存在的。剛剛泰山醫學院史衛峰教授發表了一篇預印本文章,他在蝙蝠的一株冠狀病毒S蛋白序列相同位置發現了3個氨基酸(PAA)插入位點,這就說明它不是人為插入的,而是在蝙蝠種群里就有的。所以關于人為插入的問題,我在這里也給大家解釋清楚了。
 
我們看到在新型冠狀病毒、蝙蝠冠狀病毒、穿山甲冠狀病毒的S基因比SARS病毒、MERS病毒都要長。長的地方就是圖示的藍色三角的點。這部分不僅在新型冠狀病毒里邊存在,在蝙蝠、穿山甲里面都存在,所以這些插入的位點都是自然進化而來。 
 
就整個基因組序列來說,與新型冠狀病毒最近的是蝙蝠冠狀病毒TG13,近似性達到96%;再遠一點的是穿山甲兩個病毒株,一個是85%,一個92%;再遠一點的就是SARS,只有79%, MERS病毒就更遠了。那么,怎么去判斷這個病毒到底是和SARS近還是遠呢?如果我們光看79%,為何又說它們屬于同一個種?
 
S基因進化分析
 
一個新的病毒被發現后,我們首先要分析它的進化地位。下圖是通過生物信息學繪制的分子進化樹,這里列出的是感染人類或者其他哺乳動物的阿爾法和貝塔冠狀病毒。其中大部分病毒是從蝙蝠里檢測到的。
 
這里我們重點要看圖片上方 Sabecovirus 的部分,即SARS樣冠狀病毒的種,它具有非常廣泛的多樣性。進一步細化分析可以將其分為四簇。簇1包括SARS在內的還有蝙蝠SARS樣冠狀病毒,簇3包括穿山甲冠狀病毒、新型冠狀病毒和蝙蝠來源的冠狀病毒TG13,簇2和4都是來自于蝙蝠的。簇1和3已經出現了病毒跨種感染到人的事件,那么它們發生了哪些更細致的變化引發跨種感染呢?這就要看S蛋白的更精細的序列。
 
有關SARS病毒的研究表明,SARS病毒可以用ACE2作為受體,與SARS的結合最緊密的ACE2關鍵位點叫受體結合基序(RBM),見上圖左上角的晶體結構。我們把受體結合基序拿出來進一步分析,發現SARS樣冠狀病毒又可以分為兩簇,一簇是長的,包括SARS、新型冠狀病毒,一簇是短的,包括蝙蝠來源的ZC45等。
 
我們在前期研究中就發現蝙蝠來源的WIV1和SHC04是能夠用ACE2做受體的,現在知道SARS、新型冠狀病毒也是可以的,所以我們推測穿山甲冠狀病毒以及RaTG13應該也是可以用ACE2作為受體的。
 
這個解析的分子結構告訴我們,這一類病毒都有可能使用ACE2做受體,也就是說都可能存在跨種感染人的風險。
 
自然宿主與中間宿主
 
經過以上基因組分析、進化關系分析,我們想問的是這些病毒到底是從哪里來?是跟穿山甲有關系,還是跟蝙蝠有關系?這里就涉及到一個自然宿主和中間宿主的問題,蝙蝠是自然宿主嗎?穿山甲是中間宿主嗎?要進行合理的判斷,還需要一些分子證據。
 
作為自然宿主,必須是長期攜帶與某一人類病毒有親緣關系的病毒、攜帶的病毒具遺傳多樣性、攜帶病毒的動物不發病,而且與中間宿主有生態交集。
 
首先來說蝙蝠,占哺乳動物的20%,也是攜帶病毒最多的哺乳動物。然后是占哺乳動物30%的嚙齒類動物,也是很多病毒和細菌的攜帶者。再就是禽類,野禽是高致病禽流感病毒的自然宿主。它們都有可能和一些家養動物或者是馴養的野生動物有生態交集。
 
作為中間宿主,肯定要與野生動物有生態交集,它偶然被野生動物攜帶的病毒感染,并且產生群體的流行,能夠在家養動物中流行且要發生變異。然后,這些中間宿主和人有密切接觸機會,才能夠把病毒成功傳到人類。最主要的證據就是分子證據。如果在某一類中間宿主檢測到了和新型冠狀病毒達到99%一致度的病毒,就可以確定這一類宿主就是其中間宿主。但遺憾的是,穿山甲病毒中一致性最高的是92%的基因組,蝙蝠中最高的是96%,這兩個病毒都不可能在短時間內跨種感染人并快速進化到新型冠狀病毒。
 
穿山甲里邊有兩株病毒呈現出了遺傳多樣性,蝙蝠攜帶病毒的遺傳多樣性就更廣了。所以我們能不能大膽推測穿山甲也有可能不是中間宿主而是自然宿主呢?只有分子證據才能夠給我們確鑿的答案。因此,到現在,新型冠狀病毒的中間宿主還是未知。
 
溯源工作是一個長期漫長的工作,我們要給科學家一定的時間和耐心,讓他們去尋找最終的中間宿主。找到中間宿主就可以回答“新型冠狀病毒會不會再回來”,因此這項工作非常重要。
 
下一個“新”冠狀病毒
 
大家可能要問:下一個冠狀病毒會不會出現?我推測這是大概率事件,但是我們不知道什么時候什么地點哪一種冠狀病毒會來。
 
SARS爆發以后,我的團隊以及國內其他團隊都開始找SARS病毒的自然宿主。我們十幾年的工作發現,在我國11個省市的蝙蝠種群里面都檢測到了蝙蝠SARS樣冠狀病毒,其中有9種蝙蝠主要是菊頭蝠科成員攜帶SARS樣冠狀病毒。
 
SARS樣冠狀病毒可以分為4個進化分支,在廣東、廣西、云南這些地方存在兩個進化分支共同存在的情況。在這些省份,蝙蝠的遺傳多樣性很大,蝙蝠攜帶病毒的遺傳多樣性也很大, 病毒的遺傳多樣性為病毒跨種感染儲備了很好的遺傳物質儲備,因此這些省份可能是SARS樣冠狀病毒爆發和溢出的重要熱點。
 
除了進化分析,在十幾年追尋SARS源頭的過程中,我們也重視分子證據。我們前期研究發現,在蝙蝠SARS樣冠狀病毒中有一簇病毒是可以用ACE2做受體的,這一組病毒是有潛在風險的。其中的一組就是2013年發現的WIV1病毒。對此結果我們已經發表了文章。
 
其實,在流行病學調查過程中,我們也發現和蝙蝠洞密切接觸的人群里會有被感染痕跡,我們能夠檢測到SARS樣冠狀病毒的抗體,但是這些人都沒有產生任何臨床癥狀,也就說明可能存在蝙蝠病毒直接感染人的機會,但是機會非常少,而且它是可以被人體清除的。
 
蝙蝠冠狀病毒的遺傳多樣性
 
下圖顯示的是我們在國內檢測的12種蝙蝠冠狀病毒。上面標注的點越多,說明陽性樣本多;點分布的范圍越大,說明遺傳多樣性越大。陽性率高、分布遺傳多樣性大的包括HKU2,2017年已經跨種感染到豬。而SARS樣冠狀病毒已經有兩株病毒跨種感染到人了。
 
MERS爆發在中東,但是在我們國家有這一大簇的我們稱為MERS簇的病毒存在。我們認為這一簇病毒也是有潛在的跨種感染風險的。在沒有發現任何跨種感染的潛在風險的HKU9那里,也可以看到它的遺傳多樣性很廣。所以從進化和遺傳多樣性方面,我們判斷是蝙蝠冠狀病毒跨種感染是大概率事件,應該提前預防。
 
防控策略
 
我一直提醒要預防下一次SARS樣冠狀病毒跨種感染的情況。但是沒有想到就發生在2019年的年底,也沒想到就發生在我生活的城市。
 
大家會問,這么多野生動物病毒,肯定是能夠跨種感染,難道我們就沒有辦法了?
 
實際上,從整個人類冠狀病毒的發現來看,對于所有的人冠狀病毒,都能找到它的野生動物的來源,要么是蝙蝠,要么是嚙齒類。它們大部分都有一個中間宿主。只有幾個病毒的中間宿主無法找到。也就是說冠狀病毒能感染到人類社會需要跨過兩個障礙,第一個障礙就是它和家養動物之間的,第二個就是家養動物到人之間的。因此,如果我們能夠在這兩個環節設置一些屏障,是不是能夠預防這些病毒的跨種感染了呢?
 
首先,我們應該集中在野生動物源頭預防,養成良好的文明生活習慣,杜絕野生動物消費,減少對野生動物的侵害,最好不要在它的棲息地去蓋各種各樣的養殖場,減少家養動物與野生動物之間的接觸。所以我們現在提倡的是:人類的健康要建立在野生動物和家養動物健康的基礎上。
 
另一個可以做的就是病原監測工作,我們可以監測大自然存在的這些病毒,花很少的代價,去主動發現病人,評估風險,提前預警,把預防的關口前移。在病毒找到我們之前,先找到病毒。我們人類有能力控制這些野生動物傳播的新發傳染病。
 
這些不是我們 “能不能做” 的事情,而是 “去不去做” 的事情。
 
好,今天我的分享就到此結束,謝謝大家。
 
 
問答環節 
 
 · 問:聽說華南海鮮市場在12月底的關閉,客觀上使得溯源變得極其困難,我想聽聽石老師怎么看的,如果是你會如何做?
 
答: 你剛才提的這個問題確實是存在的!我們看SARS病毒當年的溯源,實際上是香港的科學家第一時間找到了中間宿主,也就是在關閉市場之前把廣東市場上的動物樣本都采集了。而我們經過了8年才找到自然宿主的源頭,所以說及時采取野生動物或者市場上野生動物的樣本,這個環節已經沒有了。在這個環節丟失的情況下,我有兩個建議:
 
1. 通過病人來追蹤。還有從事野生動物交易的人,在關閉市場以后交易的動物到哪里去了?這些動物最初是從哪里來的?我們要去知道來龍去脈。
 
2. 到自然宿主生活的地方去。比如說我們在云南發現了跟這個病毒最近的病毒,那么是不是可以去云南及周邊國家,從蝙蝠、馴養的野生動物里發現蛛絲馬跡。
 
· 問:你曾說2019新型冠狀病毒是大自然給人類不文明生活習慣的懲罰,我想你是指吃野味,你從哪一種被吃的動物身上找到了此次新冠病毒十分相近的病毒?
 
答: 我指的是我們馴養動物的過程中,把野生動物的病毒帶到了人類社會。我們這次沒有找到任何被吃的動物身上的跟新冠病毒很近的病毒,只在源頭野生動物中找到了給它近似的,但是只有96%的核苷酸一致度。
 
· 問:病毒變異會影響核酸檢測結果嗎?需要更新試劑嗎?
 
答: 這要看這個變異是在哪些地方,如果變異正好是在核酸檢測的靶位點,就是引物這個位置就要更新方法了。如果不是那個靶位點,就不需要更新。
 
· 問:我們最終會如何戰勝新冠病毒,可能有哪些方式?
 
答: 第一個就是我們現在正在做的事情,就是隔離。隔離這是最有效的一個法寶。那么,無癥狀感染要怎么辦?有沒有可能這個病毒最終在人群中安營扎寨了?這樣的話,要最終戰勝新冠病毒,就要依賴藥物和疫苗。謝謝。
 

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